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本试剂盒通过除去柱上残余蛋白、脂类和金属镍离子、再重新挂镍进行镍柱原位再生。

镍柱纯化是为了纯化带有6个组氨酸（碱性氨基酸）标签的重组蛋白而设计，它具有高度的亲和力和选择性。如果纯化同一种蛋白，镍柱介质不需要再生，可以重复使用3～5次。通常在使用3～5次后，结合效率会有所下降，需用简单再生后才可再使用。当镍柱介质的颜色由浅蓝色变成灰褐色或白色时，则镍离子已经从柱子中丢失，镍柱介质需彻底再生后才能使用。

• 可以对镍柱介质进行彻底的原位清洁和再生，极大恢复镍柱介质的活性。
  
• 提供所需成分，不需用户要单独准备各成分和优化条件。
  
• 适用于各种含镍介质。
  
• 原位清洁和再生，在层析柱中进行，不需要灌柱，简单快捷。
  
• 本制品可以彻底清洁和再生已经装有5mL镍柱介质的层析柱20次。

• 让待再生的、含有5mL镍柱介质的层析柱下端流干所有溶液。如果所用镍柱的体积不是5mL，则下面的所有溶液的体积需要相应调整。
  
• 用2倍体积（10mL）的再生缓冲液A洗柱。
  
• 用2倍体积的自备去离子水洗柱。
  
• 用2倍体积的1×再生缓冲液B洗柱。（本试剂盒提供5×的再生缓冲液B，用时可用去离子水将其稀释成1×再生缓冲液B。如果配10mL 1×再生缓冲液B，将2mL 5×再生缓冲液B和8mL去离子水混合均匀即可)。
  
• 用1倍体积的自备25%乙醇洗柱。
  
• 用1倍体积的自备50%乙醇洗柱。
  
• 用1倍体积的自备75%乙醇洗柱。
  
• 用5倍体积的自备100%乙醇洗柱。
  
• 用1倍体积的自备75%乙醇洗柱。
  
• 用1倍体积的自备50%乙醇洗柱。
  
• 用1倍体积的自备25%乙醇洗柱。
  
• 用1倍体积的自备去离子水洗柱。
  
• 用5倍体积的1×再生缓冲液C洗柱（本试剂盒提供5×的再生缓冲液C，用时可用去离子水将其稀释成1×再生缓冲液C。如果配25mL 1×再生缓冲液C，将5mL 5×再生缓冲液C和20mL去离子水混合均匀即可)。
  
• 用3倍体积的自备去离子水洗柱。
  
• 用2倍柱体积的1×挂镍液洗柱。(本试剂盒提供5×挂镍液，用时可用去离子水将其稀释成1×挂镍液。如果配15mL1×挂镍液，将3mL 5×挂镍液和12mL去离子水混合均匀即可)。
  
• 用2倍柱体积的自备双蒸水洗柱。
  
• 用2倍柱体积的再生缓冲液A洗柱。
  
• 如果需要立即使用，则用2倍柱体积的自备结合缓冲液平衡镍柱介质(一般的His纯化试剂盒都有结合缓冲液)，然后进行纯化操作。如果需要长期保存，则加入2倍体积的25%乙醇洗柱，在液面下降到快接近镍柱介质表面时堵住层析柱的出口，再盖上盖子，放4℃放置。